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第164章 实验正式开始(1/3)

    江河今日,提前下班。

    医院这边的子弹,且让它先飞一会儿。

    回学校推进科研项目去。

    重症急性胰腺炎的论文已经发出,接下来的重头戏,是miRNA早筛。

    这玩意做出来,是真正能撼动全世界的核武器,更是他前世今生执念的所在:

    ——攻克胰腺癌,从极早期的精准筛查开始。

    返回南医大的公交车,江河在项目组的QQ群里发了一条消息。

    所有人,一小时後,实验室开会。

    实验室。

    江河进去的时候,众人都乖巧坐着。

    老大。易向晚道,你不是上班麽?怎麽这会儿就回来了?没有迎新聚餐什麽的?

    聚餐没有,倒是给我排了十五张重症床位。

    啊,十五张?附一院现在把新人当牲口使啊?

    没事,不用管医院那边,今天喊你们过来,是因为我们前期收集的几百份冻存血清样本已经全部到位了,miRNA早筛项目,从今天开始,正式进入湿实验阶段。

    此话一出,几个人的神色瞬间变得严肃。

    跟江河混了这麽久,他们很清楚这个项目的分量。

    江河从包里拿出一沓列印好的A4纸,分发给众人。

    这是我这两天做出来的实验方案,大家先看一看。

    众人接过方案,低头翻阅。

    江河:这个项目的前景有多大,我以前跟你们说过,但我今天必须给你们打个预防针,这个过程,会极其枯燥,且充满挫折。

    简单来说,我们要在血液里,找到与肿瘤相关的miRNA,目前,针对血清miRNA的商业化提取试剂盒还不够成熟,我们只能用最基础的方法来做。

    江河站起身,走到白板前,拿起马克笔画了一个简单的流程图。

    第一步,RNA提取,这是最耗时的一步,也是你们未来几个月每天都要重复的工作。

    我们手头有近六百份血清样本,我要求你们使用Trizol LS试剂法来进行提取,因为血清中本身存在大量的RNase(核糖核酸酶),如果不迅速裂解,我们的目标RNA就会降解得一乾二净。

    记住几个核心要点。

    第一,绝对的无酶环境,我们的枪头、EP管必须是去RNA酶处理过的,台面每天实验前用RNaseZap喷洒後,再用dEPC水擦拭。

    第二,加氯仿後的相分离,离心完,吸取上层水相的时候,手千万不要抖,哪怕少吸一点水相,也绝不能吸到中间的白色蛋白层,一旦污染,後面的数据全废。

    唐培认真地在方案上做着笔记:老大,提取完之後呢?

    提取完之後,是逆转录(RT)和实时萤光定量PCR(qPCR)。

    江河写下了一个数学公式。

    这是相对定量的计算公式,但因为miRNA太短了,只有大约22个核苷酸,传统的随机引物根本无法对其进行逆转录,所以,我们需要在逆转录之前,进行Poly(A)加尾,或者使用特异性的茎环(Stem-loop)引物。

    现阶段,我们用最基础的加尾法,这些长周期、重复性的基础提取和建库工作,我今天全部分配下去,两人一组,轮班倒,一个月内,我要看到这六百份样本的A文库全部建立完毕,听明白了吗?

    顾亦舟严肃点头:没问题老大,交给我们。

    江河看着手里的实验方案,突然想到副院长张随。

    张随是美国约翰·霍普金斯大学医学院的博士後。

    在08年,全球范围内在miRNA循环标志物领域走得最前沿的,除了哈佛的几家附属医院,就是约翰·霍普金斯的肿瘤学团队。

    他们是江河这个项目在国际上最大的竞争对手。

    想要在国际顶刊上抢发标准,光有数据有时候是不够的。

    如果能借用张随在霍普金斯大学的人脉网络,比如让他作为通讯作者之一与国外同行进行学术沟通。

    这篇文章在投向《柳叶刀·肿瘤学》或者《新英格兰医学杂志》时,面临的阻力会小得多。

    不过,这些都是後话。

    打铁还需自身硬,先把数据跑出来再说。

    江河收回思绪。

    好了,戴上手套,我现在带你们做第一批样本的提取演示,所有人盯紧我的操作细节。

    接下来的两个小时,实验室里热火朝天。

    江老师事无巨细,教学非常认真。

    加入Trizol LS,加入氯仿,4度离心机设定。

    围观的几个人眼睛都不眨一下。

    他们跟着江河做了几次科研了,举手投足间已经有了一丝老实验员的沉稳。

    演示结束,江河将样本放进-80度超低温冰箱。

    就按这个标准来,今晚先做十个样本练手,明天下班我会过来查你们的纯度数据。
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